人白細(xì)胞介素4（IL-4）elisa試劑盒試驗條件選擇
更新時間：2017-05-23 點擊次數(shù)：1093次人白細(xì)胞介素4(IL-4)elisa試劑盒簡介
IL-4
結(jié)構(gòu)：人和小鼠的IL-4CDna均已克隆成功，并獲得了相應(yīng)的重組產(chǎn)品。成熟IL-4分子量為18～19KD的糖蛋白。
功能：主要由Th2細(xì)胞、肥大細(xì)胞及嗜堿性粒細(xì)胞產(chǎn)生（IL-4由抗原或絲裂原刺激的CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生，活化的肥大細(xì)胞亦可產(chǎn)生IL-4。）。能夠促B細(xì)胞增殖、分化；誘導(dǎo)IgG1 和IgE產(chǎn)生；促進(jìn)Th0細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化；抑制Th1細(xì)胞活化及分泌細(xì)胞因子；協(xié)同IL-3刺激肥大細(xì)胞增殖等。IL-4的生物學(xué)活性包括以下幾個方面：①促使抗原或絲裂原活化的B細(xì)胞分裂增殖，但其作用遠(yuǎn)弱于IL-2；然而IL-4能促使靜止的B細(xì)胞表達(dá)MHCⅡ類分子，增強(qiáng)B細(xì)胞的抗原遞呈能力，因此曾稱為B細(xì)胞刺激因子。IL-4是Ig重鏈基因類轉(zhuǎn)換的主要調(diào)節(jié)因子，能促使B細(xì)胞表達(dá)和分泌IgE。此外，IL-4還能誘導(dǎo)B細(xì)胞表達(dá)低親和力fc受體。②象IL-2一樣，IL-4也是CD4+T細(xì)胞的自分泌性生長因子；此外，IL-4還能促進(jìn)tc細(xì)胞的活性。③IL-4不能刺激巨噬細(xì)胞增殖，但可增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的功能；巨噬細(xì)胞受刺激后Ⅱ類抗原和fcγr的表達(dá)量均明顯增加；同時巨噬細(xì)胞遞呈抗原的能力及對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒素作用也顯著增強(qiáng)。④IL-4與IL-3協(xié)同可維持和促進(jìn)肥大細(xì)胞的增殖，在某些起敏反應(yīng)性疾病發(fā)生中具有一定的意義；可與CSF協(xié)同作用，促進(jìn)骨髓造血前體細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)髓樣細(xì)胞定向分化；誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)血管細(xì)胞粘附分子-1（VCAM-1），對淋巴細(xì)胞的遷移具有一定意義。
人白細(xì)胞介素4(IL-4)elisa試劑盒試驗條件選擇
（1） 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。
（3） 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
（4） 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。
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