T細(xì)胞亞群檢測(cè)試劑盒的組成成分有哪些
更新時(shí)間:2018-12-05 點(diǎn)擊次數(shù):1434次T細(xì)胞亞群檢測(cè)試劑盒的組成成分有哪些?
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T細(xì)胞亞群檢測(cè)試劑盒組成:
1. 防脫片劑2ml
2. 固定液10ml
3. A 小鼠抗人CD3 單抗1ml
B 小鼠抗人CD4 單抗1ml
C 小鼠抗人CD8 單抗1ml
4. 生物素標(biāo)記羊抗小鼠IgG( IgG/Bio) 1.5ml × 2
5. 堿性磷酸酶標(biāo)記鏈霉卵白素(S-A/AP) 1.5ml × 2
6. A 底物增強(qiáng)劑( 40×) 200μl
B 底物液( 40× ) 200μl
C 底物緩沖液( 10× ) 800μl
7. 細(xì)胞核復(fù)染液5ml
8. 封片劑1ml
9. 記號(hào)筆1 支
10. PBS 2 包(1000ml)
T細(xì)胞亞群檢測(cè)試劑盒標(biāo)本制備:
取肝素抗凝(25μl/ml)的靜脈血1~2ml,PBS 稀釋1-2 倍后,沿裝有等量淋巴細(xì)
胞分離液的試管壁混勻緩慢加至液面上層,保持兩種液體界面清晰,離心(2000
轉(zhuǎn)/分)15-20 分鐘,吸取兩液面交界處的單個(gè)核細(xì)胞層,加5 倍PBS,離心(1000
轉(zhuǎn)/分)5 分鐘,棄上清液,沉淀即為單個(gè)核細(xì)胞。利用試管中剩余的少許回流
液體(約一滴)混勻細(xì)胞,制成單個(gè)核細(xì)胞懸液。滴30μl 細(xì)胞懸液于載玻片上,
靜置2 分鐘使細(xì)胞下沉粘附于玻片上,吸去液體,快速吹干或37℃溫箱1 小時(shí)
烤干?;蛴肞BS 將單個(gè)核細(xì)胞調(diào)至2×105 個(gè)/ml,離心涂片機(jī)1000 轉(zhuǎn)離心1-2
分鐘制片,快速吹干或37℃溫箱1 小時(shí)烤干。涂片前取防脫片劑5-10μl 均勻推
片,亦可用棉簽粘取防脫片劑均勻涂于干凈玻片上,待干后制備細(xì)胞涂片,以防
掉片。
T細(xì)胞是一個(gè)不均一的細(xì)胞群體,分類(lèi)方法有多種.按細(xì)胞表面分化抗原(CD)的不同,可分為CD4+和CD8+兩大亞群;按T細(xì)胞表面受體(TCR)的不同,可分為αβT細(xì)胞γδT細(xì)胞;按功能可分為輔助性T細(xì)胞(Th 細(xì)胞)、抑制性T細(xì)胞(Ts細(xì)胞)、細(xì)胞毒T細(xì)胞(CTL或Tc細(xì)胞)和遲發(fā)型超敏反應(yīng)T細(xì)胞(TDTH細(xì)胞);按對(duì)抗原應(yīng)答的不同,分為初始T細(xì)胞(naive T cell)、活化的T細(xì)胞(activated T cell)和記憶性T細(xì)胞(memory T cell);以及區(qū)別于傳統(tǒng)T細(xì)胞的NKT細(xì)胞等等
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