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ELISA實驗中標本因素對于實驗結果的影響

更新時間:2024-04-29   點擊次數:232次

ELISA實驗中標本因素對于實驗結果的影響

  以辣根過氧化物酶(HRP)為標記的ELISA測定中,殘留在孔內的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性,催化底物顯色造成假陽性;混有紅細胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內不易洗凈;如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會產生假陽性反應;標本凝固不全,在研究試驗中,有時為了爭取時間而快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結果;采血試管洗滌不*、反復使用易交叉污染;塑料試管能吸附抗原物質,樣本久置在塑料管內會使樣本內抗原含量下降造成假陰性。 


  因此血清標本宜在新鮮時檢測,禁用嚴重溶血的標本。一般說來,在5 d內測定的血清標本可放置于2~8℃,標本在冰箱中保存時間過長易導致血清IgG聚合,使間接法的試劑本底加深。超過1周測定的需-20℃保存。凍結血清融解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻并避免產生氣泡。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。

反復凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存做多次檢測,宜少量分裝冰存;使用一次性玻璃試管或真空采血管;并使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會增加OD值,可能與高濃度肝素具有強大的負電荷,能吸附酶標記物,不易洗脫有關;EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性;血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標本采集時用帶分離膠或一次性真空促凝采血管。 

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