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超微量 Na +K+ 、Ca 2+Mg 2+ -ATP 酶測(cè)試盒 生化試劑

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  • 參考價(jià):0~0

超微量 Na +K+ 、Ca 2+Mg 2+ -ATP 酶測(cè)試盒,取肝素抗凝全血,1000轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,棄上層血清,留下層壓積紅細(xì)胞,取一定量的壓積紅細(xì)胞,加 49 倍的雙蒸水,例如取 5μl 的壓積紅細(xì)胞加入 245μl 雙蒸水中,混勻,使其充分溶血,對(duì)光觀察直至溶液透亮。

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超微量 Na +K+ 、Ca 2+Mg 2+ -ATP 酶測(cè)試盒

(測(cè)紅細(xì)胞)

一、試劑組成與配制:

22.png

 

二、紅細(xì)胞的前處理:

1、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(見(jiàn)附錄)或血紅蛋白測(cè)定(試劑本所有售)。

2、紅細(xì)胞溶血液的制備:

①、壓積紅細(xì)胞溶血液的制備取肝素抗凝全血,1000

轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,棄上層血清,留下層壓積紅

細(xì)胞,取一定量的壓積紅細(xì)胞,加 49 倍的雙蒸水,

例如取 5μl 的壓積紅細(xì)胞加入 245μl 雙蒸水中,混

勻,使其充分溶血,對(duì)光觀察直至溶液透亮。如果

預(yù)試結(jié)果太高,再將溶血液稀釋成不同濃度再進(jìn)行

預(yù)試后,再?zèng)Q定取樣濃度。

②、全血紅細(xì)胞溶血液的制備:取小鼠全血,輕輕搖勻,

取一定量的全血按照 124 的體積比加 24 倍雙蒸

水,制成 25 倍稀釋的溶血液,例如取 5ul 的全血

加雙蒸水 120ul 充分混勻,制成 25 倍稀釋的溶血

液。對(duì)光觀察直至溶液透亮。如果預(yù)試結(jié)果太高,

再將溶血液稀釋成不同濃度再進(jìn)行預(yù)試后,再?zèng)Q定

取樣濃度。

[ 1]:制備好的溶血液盡快進(jìn)行檢測(cè),否則易失活,因而必須在所有的

準(zhǔn)備工作做好以后再配制溶血液。

[ 2]:用不完的抗凝全血 4℃可保存 23 天, -20℃以下保存一周或者

更長(zhǎng)時(shí)間。

[ 3]:不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑稀釋樣本。

[ 4]:預(yù)試結(jié)果將絕對(duì)吸光度值(測(cè)定管吸光度值對(duì)照管吸光度值)

控制在 0.2 左右為宜。

三、規(guī)范操作步驟:

1、酶促反應(yīng):

33.png

 

44.png

 

55.png

 

附錄Ⅰ:紅細(xì)胞計(jì)數(shù)法

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)有以下三種方法,只需取其中一種即可以。

1、計(jì)數(shù)板直接紅細(xì)胞計(jì)數(shù):

①、紅細(xì)胞稀釋液的配制:檸檬酸三鈉 3.8 克,甲醛 1mL

雙蒸水 100mL,混勻,4℃保存。

②、 1 支試管,加入紅細(xì)胞稀釋液 2mL,取抗凝全血 10µL

加入試管稀釋液中,反復(fù)吹吸數(shù)次,再將試管顛倒數(shù)次

混勻。

③、取一滴稀釋血液灌入計(jì)數(shù)板。(應(yīng)一次灌滿,而且不

要灌得太多。)

④、用高倍鏡計(jì)數(shù)左上、左下、右上、右下,中央 5 個(gè)中

方格的紅細(xì)胞數(shù),將數(shù)得的數(shù)字×10 10,即為每升血中

的紅細(xì)胞數(shù)。

2、光電比濁法計(jì)紅細(xì)胞數(shù):

取試管 1 支,加入上述紅細(xì)胞稀釋液 4mL,再取 20µL

抗凝全血,加入 4mL 稀釋液中,反復(fù)吹吸數(shù)次,再將試

管顛倒數(shù)次混勻,立即倒入比色杯中,于 540nm1cm

徑,雙蒸水調(diào)零進(jìn)行比色,記下吸光度值。以計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)

的紅細(xì)胞的數(shù)值為橫坐標(biāo),以相應(yīng)管的吸光度值為縱坐

標(biāo),作標(biāo)準(zhǔn)曲線。您可以不做曲線,用附錄Ⅱ參考標(biāo)準(zhǔn)曲

線圖二(鼠紅細(xì)胞數(shù)與比濁法吸光度換算曲線)。根據(jù)標(biāo)

準(zhǔn)曲線查出紅細(xì)胞數(shù)。

3、用血紅蛋白(Hb)來(lái)?yè)Q算紅細(xì)胞數(shù):

10µL 抗凝全血加入 2.5mL 血紅蛋白測(cè)試液(本所

有供應(yīng))中,混勻,靜置 10 分鐘,于 540nm,1cm 光徑,

雙蒸水調(diào)零進(jìn)行比色。將測(cè)得的吸光度乘以 367.7 即為血

紅蛋白的值。以計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的紅細(xì)胞的數(shù)值為橫坐標(biāo),以

相應(yīng)管的血紅蛋白數(shù)為縱坐標(biāo),作標(biāo)準(zhǔn)曲線。您可以不做

曲線,用附錄Ⅱ的參考標(biāo)準(zhǔn)曲線圖一(鼠紅細(xì)胞數(shù)與血紅

蛋白數(shù)的換算曲線)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出紅細(xì)胞數(shù)。

超微量 Na +K、Ca 2+Mg 2+ -ATP 酶測(cè)試盒

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