超微量 Na +K+ 、Ca 2+Mg 2+ -ATP 酶測(cè)試盒 生化試劑
- 型 號(hào):
- 參考價(jià):0~0
超微量 Na +K+ 、Ca 2+Mg 2+ -ATP 酶測(cè)試盒,取肝素抗凝全血,1000轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,棄上層血清,留下層壓積紅細(xì)胞,取一定量的壓積紅細(xì)胞,加 49 倍的雙蒸水,例如取 5μl 的壓積紅細(xì)胞加入 245μl 雙蒸水中,混勻,使其充分溶血,對(duì)光觀察直至溶液透亮。
超微量 Na +K+ 、Ca 2+Mg 2+ -ATP 酶測(cè)試盒
(測(cè)紅細(xì)胞)
一、試劑組成與配制:
二、紅細(xì)胞的前處理:
1、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(見(jiàn)附錄)或血紅蛋白測(cè)定(試劑本所有售)。
2、紅細(xì)胞溶血液的制備:
①、壓積紅細(xì)胞溶血液的制備:取肝素抗凝全血,1000
轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,棄上層血清,留下層壓積紅
細(xì)胞,取一定量的壓積紅細(xì)胞,加 49 倍的雙蒸水,
例如取 5μl 的壓積紅細(xì)胞加入 245μl 雙蒸水中,混
勻,使其充分溶血,對(duì)光觀察直至溶液透亮。如果
預(yù)試結(jié)果太高,再將溶血液稀釋成不同濃度再進(jìn)行
預(yù)試后,再?zèng)Q定取樣濃度。
②、全血紅細(xì)胞溶血液的制備:取小鼠全血,輕輕搖勻,
取一定量的全血按照 1:24 的體積比加 24 倍雙蒸
水,制成 25 倍稀釋的溶血液,例如取 5ul 的全血
加雙蒸水 120ul 充分混勻,制成 25 倍稀釋的溶血
液。對(duì)光觀察直至溶液透亮。如果預(yù)試結(jié)果太高,
再將溶血液稀釋成不同濃度再進(jìn)行預(yù)試后,再?zèng)Q定
取樣濃度。
[注 1]:制備好的溶血液盡快進(jìn)行檢測(cè),否則易失活,因而必須在所有的
準(zhǔn)備工作做好以后再配制溶血液。
[注 2]:用不完的抗凝全血 4℃可保存 2~3 天, -20℃以下保存一周或者
更長(zhǎng)時(shí)間。
[注 3]:不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑稀釋樣本。
[注 4]:預(yù)試結(jié)果將絕對(duì)吸光度值(測(cè)定管吸光度值—對(duì)照管吸光度值)
控制在 0.2 左右為宜。
三、規(guī)范操作步驟:
1、酶促反應(yīng):
附錄Ⅰ:紅細(xì)胞計(jì)數(shù)法
紅細(xì)胞計(jì)數(shù)有以下三種方法,只需取其中一種即可以。
1、計(jì)數(shù)板直接紅細(xì)胞計(jì)數(shù):
①、紅細(xì)胞稀釋液的配制:檸檬酸三鈉 3.8 克,甲醛 1mL,
雙蒸水 100mL,混勻,4℃保存。
②、取 1 支試管,加入紅細(xì)胞稀釋液 2mL,取抗凝全血 10µL
加入試管稀釋液中,反復(fù)吹吸數(shù)次,再將試管顛倒數(shù)次
混勻。
③、取一滴稀釋血液灌入計(jì)數(shù)板。(應(yīng)一次灌滿,而且不
要灌得太多。)
④、用高倍鏡計(jì)數(shù)左上、左下、右上、右下,中央 5 個(gè)中
方格的紅細(xì)胞數(shù),將數(shù)得的數(shù)字×10 10,即為每升血中
的紅細(xì)胞數(shù)。
2、光電比濁法計(jì)紅細(xì)胞數(shù):
取試管 1 支,加入上述紅細(xì)胞稀釋液 4mL,再取 20µL
抗凝全血,加入 4mL 稀釋液中,反復(fù)吹吸數(shù)次,再將試
管顛倒數(shù)次混勻,立即倒入比色杯中,于 540nm,1cm 光
徑,雙蒸水調(diào)零進(jìn)行比色,記下吸光度值。以計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)
的紅細(xì)胞的數(shù)值為橫坐標(biāo),以相應(yīng)管的吸光度值為縱坐
標(biāo),作標(biāo)準(zhǔn)曲線。您可以不做曲線,用附錄Ⅱ參考標(biāo)準(zhǔn)曲
線圖二(鼠紅細(xì)胞數(shù)與比濁法吸光度換算曲線)。根據(jù)標(biāo)
準(zhǔn)曲線查出紅細(xì)胞數(shù)。
3、用血紅蛋白(Hb)來(lái)?yè)Q算紅細(xì)胞數(shù):
取 10µL 抗凝全血加入 2.5mL 血紅蛋白測(cè)試液(本所
有供應(yīng))中,混勻,靜置 10 分鐘,于 540nm,1cm 光徑,
雙蒸水調(diào)零進(jìn)行比色。將測(cè)得的吸光度乘以 367.7 即為血
紅蛋白的值。以計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的紅細(xì)胞的數(shù)值為橫坐標(biāo),以
相應(yīng)管的血紅蛋白數(shù)為縱坐標(biāo),作標(biāo)準(zhǔn)曲線。您可以不做
曲線,用附錄Ⅱ的參考標(biāo)準(zhǔn)曲線圖一(鼠紅細(xì)胞數(shù)與血紅
蛋白數(shù)的換算曲線)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出紅細(xì)胞數(shù)。
超微量 Na +K+ 、Ca 2+Mg 2+ -ATP 酶測(cè)試盒
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