ATP 酶測定試劑盒 生化試劑
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ATP 酶測定試劑盒,此試劑盒可測試高速冷凍離心后的紅細胞膜、組織細胞膜、線粒體、微粒體的 ATP 酶。
ATP 酶測定試劑盒
(貨號:A016-1比色法)
(可測 Na +k +、Ca 2+Mg 2+、Ca 2+、Mg 2+-ATPase 樣本需高速離心 )
此試劑盒可測試高速冷凍離心后的紅細胞膜、組織細胞膜、線粒體、微粒體的 ATP 酶。
一、試劑組成與配制(50 管/48 樣 A016-1-1):
試劑一:液體 10mL×2 瓶,4℃保存。
試劑二:液體 10mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 10mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:粉劑×3 支,-20℃以下保存。用時每支加雙蒸水
5mL,現用現配。余下的-20℃以下可保存一周。
試劑五:粉劑×1 支。用時加雙蒸水 5mL,適當加熱溶解,
4℃保存。
試劑六:粉劑×1 支。用時加雙蒸水 10mL,室溫保存。
[注 1]
試劑七:液體 10mL×1 瓶。用時加雙蒸水至 25mL,4℃保
存。
試劑八:粉劑×3 瓶。用時一支加雙蒸水 40mL 溶解(溶解
后 4℃可避光保存一周)。
試劑九:粉劑×1 瓶。用時每瓶加雙蒸水 100mL 溶解。室
溫保存。
試劑十:2.5mol/L 硫酸 100mL×1 瓶,4℃保存。
試劑十一:10mmol/L 標準磷貯備液 10mL×1 瓶,4℃保存。
雙蒸水: 1 瓶。
1μmol/mL 標準磷應用液配制:用時將貯備液 10 倍稀釋,
即取 1mL 加雙蒸水至 10mL。
定磷劑的配制:按雙蒸水∶試劑十∶試劑八∶試劑九
=2∶1∶1∶1 的比例配制,配好的定磷劑應
為淺黃色,若無色則試劑失效,若是藍色
則為磷污染,定磷劑需現用現配。
二、試劑組成與配制(100 管/96 樣 A016-1-2):
試劑一: 液體 10mL×3 瓶,4℃保存。
試劑二: 液體 10mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三: 液體 10mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四: 粉劑×5 支,
-20℃以下保存。用時每支加水 5mL,
現用現配。余下的-20℃以下可保存一周。
試劑五: 粉劑×2 支。用時每支加雙蒸水 5mL,適當加熱
溶解,4℃保存。
試劑六: 粉劑×1 支。用時加雙蒸水 10mL,室溫保存。
[注 1]
試劑七: 液體 10mL×1 瓶。用時加雙蒸水至 25mL,4℃
保存。
試劑八: 粉劑×5 瓶。用時一支加雙蒸水 40mL 溶解(溶
解后 4℃可避光保存一周)。
試劑九: 粉劑×2 瓶。用時每瓶加雙蒸水 100mL 溶解。室
溫保存。
試劑十:2.5mol/L 硫酸 100mL×2 瓶,4℃保存。
試劑十一:10mmol/L 標準磷貯備液 10mL×1 瓶,4℃保存。
雙蒸水: 2 瓶。
1μmol/mL 標準磷應用液配制:用時將貯備液 10 倍稀釋,
即取 1mL 加雙蒸水至 10mL。
定磷劑的配制:按雙蒸水∶試劑十∶試劑八∶試劑九
=2∶1∶1∶1 的比例配制,配好的定磷劑
應為淺黃色,若無色則試劑失效,若是藍
色則為磷污染,定磷劑需現用現配。
[注 1]:試劑六為過飽和溶液,所以在配制時用 90℃~
100℃的熱雙蒸水 10.3mL(熱脹冷縮)邊隔水加熱
邊用玻璃棒攪拌,以使其充分溶解。一次實驗用不
完再用時可能有結晶,用之前可以再次邊隔水加熱
邊玻璃棒攪拌使其溶解。
[注 2]:配試劑用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器,也可
以用一次性塑料器皿,避免磷污染。
四、參考取樣量:
紅細胞膜取 100μL,2%組織細胞膜取 100μL,2%線粒
體取 100μL,2%微線粒體取 100-200μL。
五、如果您的樣本很多可以采用簡便操作法:
測試前將 A、B、C、D、E 五種混合試劑配制好:
根據規范操作表中各管的試劑量乘以您所需要測試的
樣本數(n)再放 1~2 只管的量(避免吸到最后試劑量不
夠),然后縱向混合。
七、測定意義:
ATP 酶存在于組織細胞膜及細胞器膜上,是生物膜上的一
種蛋白酶,它在物質運送、能量轉換以及信息傳遞方面具有重要
的作用。
八、測定原理:
ATP 酶可分解 ATP 生成 ADP 及無機磷,測定無機磷的
量可判斷 ATP 酶活力的高低。
九、注意點:
1、 此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用
試管要求嚴格,要沒有一點磷,若試管放過磷酸或磷
酸鹽緩沖液,一定要洗得非常干凈,要先用洗潔精加
水煮,再用自來水沖,最后用雙蒸水沖干凈。用
一次性塑料管或新玻璃管,避免磷污染是檢測成敗的
關鍵。
2、 定磷劑配好后,不可放置太久,一般保存一天,
現用現配。隨時放冰箱。
3、 采用先配 A、B、C、D、E 五種混合液中的幾種,
然后按簡化操作步驟進行檢測。這樣快捷、準確。
4、 所有配試劑的器皿均要專用,包括吸硫酸的吸管及盛
水的器皿,用新的。
5、本研究所有加厚的一次性塑料試管供應,請在訂購試劑
的同時訂購一次性塑料試管。
ATP 酶測定試劑盒