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抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP) 染液 生化試劑

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抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP) 染液,在酸性的緩沖液中,細胞內酸性磷酸酶催化底物水解,其生成物進而與一種穩定的重氮鹽偶聯,生成不溶性的偶氮染料沉淀,當底物中存在酒石酸時,該反應只出現在特異性細胞中。

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抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP) 染液

(Tartrate-Resistant Acid Phosphate stain)

[檢驗原理]

在酸性的緩沖液中,細胞內酸性磷酸酶催化底物水解,其生成物進而與一種穩定的重氮鹽偶聯,生成不溶性的偶氮染料沉淀,當底物中存在酒石酸時,該反應只出現在特異性細胞中。

[儲存條件及有效期]

本試劑盒室溫密封保存,有效期3 個月。所有應用液配置后要立即使用,當天一次用完。

[所需儀器]

光學顯微鏡、染缸、玻片、滴管、秒表、記號筆等。

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O具體試劑配制及操作

一、固定液:液體,40mlx1

新鮮血涂片、細胞涂片或爬片、冰凍切片用固定液固定 5~10min。石蠟包埋的切片經脫臘后不需要再固定。

、底物反應液() 、() 、() 、() 的組成及配制:

底物反應液() 組成及配制

組成:(1) Ax1 (2) B 500ulx1 (3) Cx1 (4) D 500ulx1

配制: 臨用前將 B 液用移液器吸入 A 粉中充分解配成甲液,備用再將 D 液移液器吸入 C粉中充分溶解配成乙液,備用最后將甲液與乙液混合成底物反應(),備用

底物反應液() 組成及配制:

組成:(1) Ex1(2) F 500ulx1

配制: 臨用前將底物反應液二的 F 液移液器吸入 E 粉中充分溶解配成底物反應液(),備用。

底物反應液(): Glx1 支,備用

底物反應液() 組成及配制:

組成:(1) Hx1 (2) I500ulx1

配制: 臨用前將 I液移液器吸入 H粉中充分溶解配成底物反應液四,備用。

底物孵育液的配制:

染色缸染色孵育法:

1. 將底物反應()、()()()的備液混合并混勻

2. 先在染缸內加 30 ml蒸餾水,37水浴 10 分鐘,

3. 將底物反應液()、()、()()依次加入已預溫的蒸餾水中,

4. 然后將樣本玻片固定,水洗后還末干前,,立即將樣本玻片放入已準備好的反應孵育液中,避光孵育 60 分鐘。

三、復染液:蘇木素液,10mlx1 瓶甲基綠液,10mlx1

孵育完后,取出水洗 1 分鐘,在玻片尚未干之前進行復染??捎锰K木素復染 1-2 分鐘,或用甲基綠復染 2~3 分鐘,兩者取其一。

[樣本]

O 血涂片及骨涂片

1、推片: 取全血或骨髓3 微升左右置載玻片上,將推玻片保持與載玻片 30 度角,置于血滴正前方,稍往后移與血滴接觸,血滴沿推片下緣散開,再勻速沿載玻片平面平穩向前滑動,至血液鋪完血膜為止。滿意效果為不太薄,以免細胞太少,也不要太厚,以免太重疊。

2、涼干:使涂片在空氣中自然涼干,再放入本試劑盒中的固定液內固定 2~3 分鐘, 水洗約30-60

3、一定注意水洗后不要太干時放入底物液中孵育 60 分仲 (太干后染色效果欠佳)

O切片

1、二甲苯中脫蠟 5-10 分鐘。再換用新鮮的二甲苯,脫蠟 5-10 分鐘

2、無水乙醇5 分鐘。再 90%、70%乙醇各2 分鐘。

3、水合:蒸餾水2 分鐘

O 冰凍切片

1、回溫: 將預先制作好的并保存在-20冰箱中的冰凍切片放置到切片架上回溫  5-10 分鐘。

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① 可放到37C孵箱中進行回溫;

②  37水浴箱中放置一個小盒子,再將從冰箱中取出的切片架放到小盒當中,目的是讓冰凍切片回溫到 37

2、水合:將回溫好的切片,水中浸泡 1~2 分鐘

[染色結果]

陽性反應為鮮紅色或深紅色顆粒,定位胞漿。

抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP) 染液

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